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Tris(77-86-1)及其衍生物有什么作用呢

    三羟甲基氨基甲烷(Tris)是一种应用非常广泛的有机试剂,它的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备,可用于制作药物、有机合成、生物缓冲剂等。其中在生化实验中,许多蛋白质及核酸相关的实验都需要用Tris作为生物缓冲剂。它甚至有超过磷酸盐缓冲液的趋势,本文将对其衍生缓冲液进行简述。

    TBS即Tris缓冲盐水,是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。但是缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,温度效应也大,而且易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封,此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。TBST缓冲液TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20这三种物质,是做WesternBlotting中常用的一种洗膜缓冲液。目的是洗掉非特异性吸附的蛋白质,并且维持一个接近的天然环境。其中,Tween是一种离子表面活性剂,可加速抗体非特异性结合的分离。因为WesternBlotting中所用的膜可以与蛋白质结合,孵育过程中,抗体能够与膜非特异性结合。为了防止以后曝光造成胶片背景太高,在孵育抗体后,混有Tween20的TBS能够将非特异性结合的抗体洗掉,增加特异性。TE缓冲液Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,因此,DNA在TE中的稳定性较好,不易被破坏完整性或产生开环及断裂,TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。

    将调节pH值的酸溶液换成乙酸,则获得“TAE缓冲液”(Tris/Acetate/EDTA),TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量,且双链线状DNA在其中的迁移率也较快,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果。此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。但是,TAE的缺点是缓冲容量小,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换,否则长时间电泳是不可选用的。TBE缓冲液丙烯酰胺实验以及琼脂糖凝胶电泳将调节pH值的酸溶液换成硼酸则获得“TBE缓冲液”(Tris/Borate/EDTA)。TBEBuffer是分子实验中常用的缓冲液,由Tris和硼酸、EDTA组成,所以简称为TBEbuffer。该缓冲液常用于聚电泳实验中。TBEBuffer为无色澄清液体,可在室温中储存,25℃时的pH值为8.2~8.4。在使用时要注意的是TBEBuffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶的活性。


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